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    • 专利摘要:
    本發明係有關於一種糖化血紅素之偵測晶片及其偵測方法，該偵測晶片包括：一基材；以及一生物分子層，設置於該基材上；其中，該生物分子層可為一第一抗血紅素抗體。該生物分子層可與血液樣品中的糖化血紅素與血紅素結合。之後，加入生物分子偵測層。其中，該生物分子偵測層包含抗糖化血紅素抗體以及第二抗血紅素抗體可藉由結合不同的抗原決定基以分辨血紅素中之糖化血紅素。透過本發明糖化血紅素之偵測晶片及偵測方法，可偵測糖化血紅素相對於總血紅素之含量。
    公开号:TW201307848A
    申请号:TW100129110
    申请日:2011-08-15
    公开日:2013-02-16
    发明作者:Chih-Hsing Wu；Huang-Han Chen；Shu-Hui Chen；Mei-Ling Tsai；Horng-Yih Ou
    申请人:Univ Nat Cheng Kung；
    IPC主号:G01N33-00
    专利说明:
    糖化血紅素之偵測晶片及其偵測方法
    本發明係關於一種糖化血紅素之偵測晶片及其偵測方法，尤指一種適用於反映平均血糖濃度之偵測晶片。
    根據台灣衛生署的統計結果顯示，糖尿病已成為高居國人十大死因的第四位，是一種危險性極高的疾病。由於糖尿病會引發如視網膜病變、心血管病變、腎臟病變、或神經病變等疾病，進而損壞大腦與循環系統。因此，如何有效地控制血糖便成為一項極為重要的課題。
    為了控制糖尿病的嚴重性，維持良好的飲食習慣或再搭配藥物治療，即可慢慢地將血糖濃度調控到正常的範圍，降低糖尿病引發上述各種併發症的可能性。因此，為了能夠及早發現是否罹患糖尿病或是了解血糖控制情形，血糖值的檢測成為重要的判斷之一。傳統檢測血糖時並須分別檢測空腹與/或餐後的血糖值，然而，以此種方式得到的血糖值容易受到每日飲食的影響而有明顯的波動，難以得到精準的血糖檢測結果。
    經研究證實，糖化血紅素(Glycosylated hemoglobin,HbAlc)的濃度不會因為當下的血糖濃度而發生明顯變化。當血液中的葡萄糖與HbAlc反應後，會慢慢結合形成糖化血紅素，由於兩者的結合後會長時間累積在體內，即便是飯後進行檢測也不會立即改變糖化血紅素的濃度。因此，HbAlc已被視為臨床上評估血糖控制好壞的重要依據，甚至用於篩檢糖尿病有無的最新利器之一。
    因此，本發明為了提升HbAlc的檢測方便性，發展一種適合檢測HbAlc的偵測晶片與偵測方法，藉以提升糖尿病患者實行居家照護的便利性。
    雖然三明治免疫偵測法是目前臨床檢測最具專一性、靈敏性、以及穩定再現性之方法，然而目前臨床上糖化血紅素之偵測仍以液相層析儀或單一抗體為主，主要原因之一包括難以合成兩株針對糖化血紅素不同抗原決定基(epitope)之專一抗體。本發明突破以往的限制，利用血紅素共通抗體為第一抗體，再利用血紅素與糖化血紅素專一抗體為分子偵測層來區分血紅素與糖化血紅素，此三明治免疫偵測方法不但可達到專一性、靈敏性、以及穩定再現性，更可在一片晶片上準確偵測糖化血紅素對總血紅素之比值(%)，此比值乃臨床檢測平均血糖值之重要參考指標。
    本發明之主要目的係在提供一種糖化血紅素偵測晶片，俾能偵測血液中糖化血紅素相對於總血紅素之含量，提升民眾進行血糖檢測之可靠性與方便性。
    為達成上述目的，本發明提供一種糖化血紅素偵測晶片，包括：一種糖化血紅素偵測晶片，包括：一基材；以及一生物分子層，該生物分子層係設置於該基材上，且該生物分子層係包含一第一抗血紅素抗體。
    於本發明之糖化血紅素偵測晶片中，該基材可包括一基板及一修飾層。其中，該基板較佳為一硬質基板或一軟性基板。於此，硬質基板較佳為玻璃基板或矽基板；軟性基板可為二甲基係氧烷聚合物(PDMS)、聚苯乙烯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚異丙烯、或其組合，軟性基板較佳為二甲基係氧烷聚合物(PDMS)。
    於本發明之糖化血紅素偵測晶片中，設置於基板及生物分子層之間的修飾層之材料可為聚賴胺酸(poly-lysine)或其他修飾材料，且設置修飾層之主要目的係在抗非特異性吸附。於本發明中，所使用之修飾層為多電層之氟化物，且修飾層之合成步驟可參考Anal. Chem. 82,7804-7813,2010中所述。更具體而言，本發明之修飾層由下至上包含：一兩性分子層，設置於該基板上，該兩性分子層具一親水端及一疏水端，且該疏水端係與該基板連接；一交聯疊層，設置於該兩性分子層的親水端之上方，且該交聯疊層係包含至少一正電層及至少一負電層；一連接層，設置於該交聯疊層上；以及一蛋白質固定層，設置於該連接層上。
    於本發明之糖化血紅素偵測晶片中，生物分子層除了第一抗血紅素抗體外，亦可包含其他類型可同時辯識血紅素與糖化血紅素之抗體、抗原配體、受體、或胜肽。本發明透過第一抗血紅素抗體使血液樣品中的糖化血紅素及血紅素與偵測晶片結合，再依續加入生物分子偵測層以偵測血液樣品中血紅素及糖化血紅素的濃度。於此，生物分子偵測層可包含抗糖化血紅素抗體、第二抗血紅素抗體或其他可分辨血紅素與糖化血紅素之分子，再利用連接有放光分子之非專一性之二級抗體，藉由偵測放光分子之光強度，以計算血液樣品中糖化血紅素的相對濃度。
    此外，為達成上述目的，本發明提供一種糖化血紅素偵測晶片，包括：(a)提供一糖化血紅素偵測晶片，該糖化血紅素偵測晶片包括：一基材；以及一生物分子層，該生物分子層係設置於該基材上，且該生物分子層係包含一第一抗血紅素抗體；(b)於該糖化血紅素偵測晶片上加入一血液樣品，使該血液樣品之血紅素及/或糖化血紅素與該糖化血紅素偵測晶片結合；(c)加入一抗糖化血紅素抗體或一第二抗血紅素抗體至步驟(b)之糖化血紅素檢測晶片，使該抗糖化血紅素抗體與該血液樣品之糖化血紅素結合，或使該第二抗血紅素抗體與該血液樣品之血紅素結合；(d)加入一非專一性二級抗體至步驟(c)之糖化血紅素檢測晶片，使該非專一性二級抗體分別與該抗糖化血紅素抗體或該第二抗血紅素抗體結合，其中，該非專一性二級抗體係連接一放光分子；(e)提供一光源，該光源係照射至步驟(d)之糖化血紅素偵測晶片上，使該放光分子釋放一放射光；(f)透過一偵測裝置偵測步驟(e)中該糖化血紅素檢測晶片上該放光分子之放射光強度。
    於本發明糖化血紅素之偵測方法中，步驟(b)可透過虹吸法或沾覆法，將該血液樣品加入該糖化血紅素偵測晶片。此外，於加入血液樣品至偵測晶片前，亦可先透過步驟(b’)過濾收集之血液樣品，例如：離心或通過層析管柱等，將血液進行初步的過濾，以利樣品與晶片結合進行後續分析。
    於本發明糖化血紅素之偵測方法中，步驟(c)可分別在兩個不同的糖化血紅素偵測晶片(偵測晶片上已包含血液樣品)上分別加入抗糖化血紅素抗體或第二抗血紅素抗體，或者，可於同一偵測晶片(偵測晶片上已包含血液樣品)的不同區域上分別加入抗糖化血紅素抗體或第二抗血紅素抗體，使抗糖化血紅素抗體與血液樣品中的糖化血紅素結合，並且，第二抗血紅素抗體可與血液樣品中的血紅素結合。
    於本發明糖化血紅素之偵測方法中，步驟(d)係加入一個連結有放光分子之非專一性二級抗體，透過非專一性二級抗體與上述之抗糖化血紅素抗體或第二抗血紅素抗體之良好鍵結力，再利用放光分子的光強度分別計算糖化血紅素與血紅素的分子數目。由於非專一性二級抗體連結有一放光分子，當提供一激發光照射於糖化血紅素偵測晶片上，放光分子會受到光激發而釋放一放射光。於此，較佳更加入一放光檢驗試劑，如：化學放光檢驗試劑，以大幅增加放光分子的放光強度。於此，放光分子可為一種可與非專一性二級抗體產生良好鍵結的酵素分子，如：辣根過氧化物酶(HRP)。於本發明糖化血紅素之偵測方法中，為了確保糖化血紅素的偵測準確性，設置於偵測晶片上的第一抗血紅素抗體與步驟(c)中加入的抗糖化血紅素抗體及第二抗血紅素抗體係為相互不同物種之抗體。例如：第一抗血紅素抗體可為山羊抗血紅素抗體；而第二抗血紅素抗體可為老鼠抗血紅素抗體，抗糖化血紅素抗體可為老鼠抗糖化血紅素抗體；而非專一性二級抗體可為老鼠二級抗體。當步驟(d)加入與抗糖化血紅素抗體及第二抗血紅素抗體相同物種之非專一性二級抗體時，非專一性二級抗體僅分別與相同物種的抗糖化血紅素抗體及第二抗血紅素抗體結合，而不會與不同物種的第一抗血紅素抗體結合，因而可避免連接放光分子的非專一性二級抗體與第一抗血紅素抗體結合的可能性，藉此確保糖化血紅素的偵測準確性。
    於本發明之糖化血紅素偵測方法中，步驟(f)係透過一偵測裝置偵測同一偵測晶片不同區域或不同偵測晶片上步驟(e)中之放射光強度。於此，選用之偵測裝置，例如：電荷耦合偵測器(CCD)或光偵測儀，透過偵測裝置分別偵測不同區域或不同偵測晶片上放光分子之放射光強度，藉此推算血液中糖化血紅素之含量百分比。
    因此，本發明之糖化血紅素偵測晶片可透過生物分子層之第一抗血紅素抗體將血紅素及糖化血紅素分子與本發明之偵測晶片結合，再透過生物分子偵測層之第二抗血紅素抗體及抗糖化血紅素抗體辨識血紅素中之糖化血紅素，藉此測得血液中糖化血紅素之含量。據此，本發明提供一種檢測糖化血紅素之偵測晶片，利用生物分子偵測層與連接放光分子之非專一性二級抗體計算血液中糖化血紅素的含量，以此濃度反映近期三個月內的平均血糖值，取得更為精準的平均血糖濃度。
    以下係藉由特定的具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容輕易地了解本發明之其他優點與功效。本發明亦可藉由其他不同的具體實施例加以施行或應用，本說明書中的各項細節亦可針對不同觀點與應用，在不悖離本創作之精神下進行各種修飾與變更。 《製備例1-製備PDMS軟性基板之糖化血紅素偵測晶片》
    本發明用以偵測血液中糖化血紅素之偵測晶片，可提高血糖偵測的準確性與可靠性，其偵測晶片係透過下列步驟製作：首先，將PDMS經上述多電層之氟化物修飾(參考Anal. Chem. 82,7804-7813,2010)，其主要步驟係先將經氧電漿活化後之基材分別塗佈0.25%(w/v)PEI與0.5%(w/v)的PAA，並且反覆重複4次，以形成設置於交聯疊層。於塗佈PEI與PAA的過程中間，每次利用20 ml的去離子水清洗基板，再塗佈下一層。其中，更加入30 mg/ml的EDC與10 mg/ml的NHS(交聯試劑)，使正電層與負電層之間產生醯胺鍵結。於反覆塗佈PEI與PAA達4次後，再於最上層塗佈PEI層，形成包含交錯堆疊正電層(PEI)與負電層(PAA)的交聯疊層。
    而後，加入pH 7.4、1000 μg/ml丙醯酸-聚乙二醇-N-羥基琥珀醯亞胺(ACRL-PEG-NHS)，使ACRL-PEG-NHS與PEI的胺基反應，於交聯疊層上形成一用以連接蛋白質固定層之連接層。
    接著，加入15%(v/v)溶於乙醇的FD、1%(v/v)溶於乙醇的AA、以及1%(w/v)的DPA光起始劑，於室溫下以365 nm的光持續照射40分鐘，再利用乙醇清洗晶片表面，並且置於氮氣環境中乾燥。之後，利用30 mg/ml的EDC及10 mg/ml的NHS混合溶液持續培養晶片表面2小時。於清洗過後，活化的晶片可置於20 μg/ml的蛋白質G溶液中培養4小時，使蛋白質G與AA形成良好的鍵結。
    最後，將包含蛋白質G的偵測晶片浸泡於1 μg/ml的山羊抗血紅素抗體(溶於PBST緩衝溶液)中持續2小時，再以PBST緩衝溶液沖洗偵測晶片之表面，以移除未附著於偵測晶片的第一抗血紅素抗體，製得含有第一抗血紅素抗體之糖化血紅素偵測晶片。
    據此，本發明透過上述方法製作一種用以檢測糖化血紅素之偵測晶片。如圖1所示，該偵測晶片1包括一軟性基板111設置於最底部，及一修飾層112設置於軟性基板111之上方；以及一生物分子層12設置於基材11上，其中，該生物分子層12包含一第一抗血紅素抗體121，用以結合血樣品中的糖化血紅素或血紅素分子。 《製備例2-製備玻璃基板之糖化血紅素偵測晶片》
    本實施例大致之製備方式係如同製備例1所述，其不同之處僅在於，本製備例係使用玻璃基板取代製備例1之PDMS基板。據此，本製備例所製得之糖化血紅素偵測晶片與製備例1所製得之糖化血紅素偵測晶片具有相同結構，其不同之處僅在於基板之材質。 《實施例1》-使用兩個糖化血紅素PDMS偵測晶片
    使用本發明製備例1所製作之糖化血紅素偵測晶片，透過生物分子層之第一抗血紅素抗體，可將血液樣品中的糖化血紅素及血紅素結合至偵測晶片上。之後，分別於兩個偵測晶片上加入不同的抗體(第一抗血紅素抗體及抗糖化血紅素抗體)，藉此於不同的偵測晶片上分別計算血液樣品中血紅素及糖化血紅素的數目。利用照光及偵測裝置偵測不同偵測晶片上結合的糖化血紅素與血紅素之數目多寡，以推算血液中糖化血紅素的濃度(%)。本實施例詳細之糖化血紅素的偵測方法包括下列步驟：首先，利用本發明製備例1所製作的糖化血紅素偵測晶片進行偵測，由於偵測晶片包含第一抗血紅素抗體，透過此抗體可將血液樣品中的糖化血紅素及血紅素分子停留於偵測晶片上。因此，本發明之糖化血紅素偵測晶片可用於偵測血液中糖化血紅素的相對於總血紅素之濃度。
    然後，收集受測者的血液樣品，並透過一般常用的過濾方式，例如：離心或通過層析管柱等，將血液進行初步的過濾，以利血液樣品進行後續分析。
    之後，透過虹吸法使血液樣品吸附至偵測晶片上。如圖2所示，細針頭31可戳破皮膚，使4 μl的血液樣品透過虹吸法吸附在偵測晶片32上。此時，血液樣品中的血紅素與糖化血紅素將與偵測晶片上的山羊抗血紅素抗體(即，第一抗血紅素抗體)產生良好的鍵結。
    如圖3所示，當血紅素431及糖化血紅素432透過第一抗血紅素抗體421與偵測晶片411,412結合後，分別在不同偵測晶片411,412上加入0.4 μg/ml溶於PBST緩衝溶液的老鼠抗血紅素抗體441(即，第二抗血紅素抗體)及老鼠抗糖化血紅素抗體442(即，抗糖化血紅素抗體)，使老鼠抗血紅素抗體441於第一偵測晶片411上僅與血紅素431產生專一性鍵結；並且，老鼠抗糖化血紅素抗體442於第二偵測晶片412上僅與糖化血紅素432產生專一性鍵結。
    接著，待血紅素431與糖化血紅素432分別與其抗體441,442產生良好的鍵結後，分別於偵測晶片411,412上加入0.4 μg/ml溶於PBST緩衝溶液的老鼠非專一性二級抗體451，該老鼠非專一性二級抗體451上連接有辣根過氧化物酶(HRP)之放光分子452，以作為發光的酵素分子。
    由於，晶片411上僅加入老鼠抗血紅素抗體441，以辨識血液中的血紅素431，透過計算偵測晶片411上放光分子452的放光強度可推知血液樣品中血紅素的分子數目；而晶片412上僅加入老鼠抗糖化血紅素抗體442，以辨識血液中的糖化血紅素432，透過計算偵測晶片412上放光分子452的放光強度可推知血液樣品中糖化血紅素的分子數目。於此，老鼠非專一性二級抗體451應與第二抗血紅素抗體441及抗糖化血紅素抗體442為同一物種之抗體，故該老鼠非專一性二級抗體451僅與上述兩種老鼠抗體441,442產生良好鍵結，而不會與不同物種的第一抗血紅素抗體421鍵結，藉此確保本發明之偵測準確性。
    之後，於偵測晶片上加入化學放光增強試劑，使辣根過氧化物酶受到光的激發而化學放光。當兩個偵測晶片上照射特定波長的激發光，會使老鼠非專一性二級抗體上的辣根過氧化物酶受到光激發後釋放出一放射光。
    之後，利用CCD(UVP,Bio-Imaging Systems,CA,USA)擷取畫面影像，透過兩個偵測晶片上的光強度推算血液樣品中糖化血紅素與血紅素的數目，以下列式1計算血液中糖化血紅素的含量百分比：
    HbAlc(%)=HbAlc濃度/總血紅素濃度×100%　[式1]
    其中，HbAlc濃度可代入連接在HbAlc上放光分子之放光強度平均值，而總血紅素濃度則可代入連接在血紅素上放光分子之放光強度平均值。 實驗組1-使用兩個糖化血紅素PDMS偵測晶片偵測第一樣品
    實驗組1係透過上述試驗方法偵測血液樣品中血紅素的濃度，於本實驗組中，係使用兩個糖化血紅素偵測晶片(即，第一偵測晶片及第二偵測晶片)進行檢測，但亦可在同一晶片但不同抗原決定基進行檢測。
    其中，在偵測晶片上加入血液樣品後，係分別加入第二抗血紅素抗體及抗糖化血紅素抗體至第一偵測晶片及第二偵測晶片。而後，透過連結有放光分子之非專一性二級抗體與第二抗血紅素抗體產生良好的鍵結，計算偵測晶片上的放光強度。由於第二抗血紅素抗體僅辨識偵測晶片上的血紅素分子，因此，計算偵測晶片上的放光強度可得知血紅素的總量。在此，共進行三次重複實驗，以分別取得並計算出HbAlcc及血紅素之放光強度之平均值。 實驗組2-使用兩個糖化血紅素PDMS偵測晶片偵測第二樣品
    本實驗組之實驗方法係與實驗組1相同，除了本實驗組係所使用之另一血液樣品。經由實驗組1及2之實驗結果所得之晶片上放光強度係如下表1所示，且透過前述式1，則可分別計算出實驗組1及2其所使用之血液樣品中糖化血紅素(HbAlc)相對濃度(%)。
    《實施例2》-使用單一糖化血紅素PDMS偵測晶片
    本實施例係使用本發明製備例1所製作之糖化血紅素PDMS偵測晶片，且檢測方法係與實施例1相同，除了實施例1係使用兩個偵測晶片，以分別偵測糖化血紅素及血紅素之含量；而本實施例則是使用單一晶片，但在同一晶片但不同抗原決定基進行檢測，即將此單一晶片分成兩個區域，以分別偵測糖化血紅素及血紅素之含量。 《實施例3》-使用兩個糖化血紅素玻璃偵測晶片 實驗組3-使用兩個糖化血紅素玻璃偵測晶片偵測第一樣品
    本實施例係使用本發明製備例2所製作之糖化血紅素玻璃偵測晶片，且檢測方法係與實施例1相同。
    經由在兩個偵測晶片上加入血液樣品後，再分別加入第二抗血紅素抗體及抗糖化血紅素抗體至兩個偵測晶片上，並添加連接有連結有放光分子之非專一性二級抗體，以透過計算偵測晶片上的放光強度，而可取得並計算出血液樣品中HbAlc及血紅素之放光強度之平均值。結果係如下表2所示。
    綜上所述，本發明之糖化血紅素偵測晶片透過包含專一性抗體的生物分子層與血液中的糖化血紅素及血紅素結合，再加入分別辨識糖化血紅素及血紅素的抗體及具有放光分子的二級抗體，利用光照使放光分子發光，以計算血液樣品中分別與抗糖化血紅素抗體及第二抗血紅素抗體的數目，藉此推算血液中的糖化血紅素的相對濃度。因此，本發明提供一種適合檢測血液中HbAlc的偵測晶片與偵測方法，藉此提升高血糖患者實行居家照護的便利性。
    上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。
    1．．．糖化血紅素偵測晶片
    11．．．基材
    111．．．基板
    112．．．修飾層
    12．．．生物分子層
    121．．．第一抗血紅素抗體
    31．．．針頭
    32．．．糖化血紅素偵測晶片
    411．．．第一偵測晶片
    412．．．第二偵測晶片
    421．．．第一抗血紅素抗體
    431．．．血紅素分子
    432．．．糖化血紅素分子
    441．．．第二抗血紅素抗體
    442．．．抗糖化血紅素抗體
    451．．．非專一性二級抗體
    452．．．放光分子
    圖1係本發明糖化血紅素偵測晶片之示意圖。
    圖2係包含本發明糖化血紅素偵測晶片之檢測裝置圖。
    圖3係本發明糖化血紅素偵測晶片辨識血液樣品中糖化血紅素或血紅素分子之示意圖。
    1．．．糖化血紅素偵測晶片
    11．．．基材
    111．．．基板
    112．．．修飾層
    12．．．生物分子層
    121．．．第一抗血紅素抗體
    权利要求:
    Claims (20)
    [1] 一種糖化血紅素偵測晶片，包括：一基材；以及一生物分子層，該生物分子層係設置於該基材上，且該生物分子層係包含一第一抗血紅素抗體。
    [2] 如申請專利範圍第1項所述之糖化血紅素偵測晶片，其中，該基材包括一基板及一修飾層，且該修飾層係設置於該基板及該生物分子層之間。
    [3] 如申請專利範圍第2項所述之糖化血紅素偵測晶片，其中，該基板係為一硬質基板或一軟性基板。
    [4] 如申請專利範圍第3項所述之糖化血紅素偵測晶片，其中，該硬質基板係為一玻璃基板。
    [5] 如申請專利範圍第3項所述之糖化血紅素偵測晶片，其中，該軟性基板係為一PDMS基板。
    [6] 一種糖化血紅素之偵測方法，包括：(a)　提供一糖化血紅素偵測晶片，該糖化血紅素偵測晶片包括：一基材；以及一生物分子層，該生物分子層係設置於該基材上，且該生物分子層係包含一第一抗血紅素抗體；(b)　於該糖化血紅素偵測晶片上加入一血液樣品，使該血液樣品之血紅素及/或糖化血紅素與該糖化血紅素偵測晶片結合；(c)　加入一抗糖化血紅素抗體或一第二抗血紅素抗體至步驟(b)之糖化血紅素檢測晶片，使該抗糖化血紅素抗體與該血液樣品之糖化血紅素結合，或使該第二抗血紅素抗體與該血液樣品之血紅素結合；(d)　加入一二級抗體至步驟(c)之糖化血紅素檢測晶片，使該二級抗體分別與該抗糖化血紅素抗體或該第二抗血紅素抗體結合，其中，該二級抗體係連接一放光分子；(e)　提供一光源，該光源係照射至步驟(d)之糖化血紅素偵測晶片上，使該放光分子釋放一放射光；(f)　透過一偵測裝置偵測步驟(e)中該糖化血紅素檢測晶片上該放光分子之放射光強度。
    [7] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，更包括步驟(g)：分別計算於步驟(c)中加入該抗糖化血紅素抗體得到之放射光強度，以及於步驟(c)中加入該第二抗血紅素抗體得到之放射光強度，以計算該糖化血紅素相對於血紅素之含量百分比。
    [8] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，該放光分子係為一酵素分子。
    [9] 如申請專利範圍第8項所述之偵測方法，其中，該酵素分子係為辣根過氧化物酶(HRP)。
    [10] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，該第一抗血紅素抗體與該第二抗血紅素抗體係為相互不同物種之抗體。
    [11] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，該第一抗血紅素抗體與該抗糖化血紅素抗體係為相互不同物種之抗體。
    [12] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，該二級抗體、該抗糖化血紅素抗體、及該第二抗血紅素抗體係為相同物種之抗體。
    [13] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，該偵測裝置係為一電荷耦合偵測器(CCD)或一光偵測儀。
    [14] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，該基材包括一基板及一修飾層，且該修飾層係設置於該基板及該生物分子層之間。
    [15] 如申請專利範圍第14項所述之偵測方法，其中，該基板係為一硬質基板或一軟性基板。
    [16] 如申請專利範圍第15項所述之偵測方法，其中，該硬質基板係為一玻璃基板。
    [17] 如申請專利範圍第15項所述之偵測方法，其中，該軟性基板係為一PDMS基板。
    [18] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，於該步驟(b)前更包括一步驟(b’)：過濾該血液樣品。
    [19] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，於步驟(b)中，係透過虹吸法或沾覆法，將該血液樣品加入該糖化血紅素偵測晶片。
    [20] 如申請專利範圍第6項所述之偵測方法，其中，於步驟(d)後更包括一步驟(d’)中，加入一放光檢驗試劑。
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